Куликова Л.Е., Погорельский И.П., Мокрецова И.М., Чичерин И.Ю. Х-ка антибактер. акт. биокомплексов "Нормофлорины" и пробиотика метабол. типа Хилак форте в отношении микроорганизмов, выд. из рот. полости // Евразийский Союз Ученых. 2014. VIII. С. 126–129.

Характеристика антибактериальной активности биокомплексов "Нормофлорины" и пробиотика метаболитного типа Хилак форте в отношении микроорганизмов, выделенных из ротовой полости

Куликова Л.Е., Погорельский И.П., Мокрецова И.М., Чичерин И.Ю.

ФГБОУ ВПО Вятский Государственный университет, г. Киров

Биокомплексы "Нормофлорины", а также препарат Хилак форте входят в арсенал средств, предназначенных для коррекции микробиоценоза кишечника при дисбиозах у людей различного генеза. Сам дисбиоз является следствием патологического процесса, что предполагает комплексный подход для его купирования [8].

Биокомплексы "Нормофлорины" это жидкие комплексные синбиотические (т.е. комбинация про- и пребиотиков) препараты, созданные на основе лактобацилл и бифидобактерий [4]. Биокомплекс "Нормофлорин-Л" приготовлен на основе штаммов лактобацилл L.acidophilus, биокомплекс "Нормофлорин - Б" – на основе штаммов бифидобактерий B.bifidum и B.longum, биокомплекс "Нормофлорин - Д" – на основе штаммов бифидобактерий B.bifidum, B.longum и лактобацилл L.casei.

Хилак форте – представитель пробиотиков метаболитного типа, содержит "беззародышевый водный субстрат продуктов обмена веществ"(т.е. метаболитов) кишечной палочки E.coli DSM 4087, стрептококка S.faecalis DSM 4086, лактобацилл L.acidophilus DSM 4149 L.helveticus DSM 4183[3].

Синбиотики "Нормофлорины" и метабиотик Хилак форте способствуют, согласно результатам клинических испытаний, восстановлению нормальной микробиоты кишечника биологическим путем и сохранению физиологических и биологических функций слизистой оболочки кишечника. Пробиотический эффект биокомплексов "Нормофлорины" связывают с размножением в кишечнике лактобацилл, бифидобактерий и синтезируемых витаминов, аминокислот, ферментов, а также пребиотика лактита и микроэлементов. Входящая в состав препарата Хилак форте биосинтетичемская молочная кислота и ее буферные соли восстанавливают физиологическую кислотность желудочно-кишечного тракта, а короткоцепочечные жирные кислоты обеспечивают восстановление баланса кишечной микробиоты, стимулирует регенерацию эпителия кишечной стенки [5].

Относительно антибактериальной активности известно следующее: биокомплексы "Нормофлорины" активны в отношении бацилл, стафилококков, клостридий, энтеротоксигенных кишечных палочек, клебсиелл, протея, цитробактера, кандид и др. Препарат Хилак форте, как это достоверно известно [3,4], обладает антагонистическим воздействием на сальмонеллы.

Особо следует указать на то, что, согласно клиническим наблюдениям, биокомплексы "Нормофлорины" и препарат Хилак форте оказывают положительное воздействие с первых минут попадания на слизистую оболочку рта, носоглотки и верхних отделов пищеварительного тракта. Именно здесь, во рту и носоглотке, встречаются стафилококки, стрептококки, энтерококки, лактобациллы, актиномицеты, клостридии, псевдомонады, трепонемы, нейсерии, неферментирующие энтеробактерии [6,7].

В тоже время, именно полость рта и носоглотка являются местом аппликации и первичного воздействия большинства патогенных и условнопатогенных микроорганизмов. Однако практически нет данных микробиологического плана, характеризующих чувствительность / резистентность микроорганизмов, выделенных из указанных биотопов, к биокомплексам "Нормофлорины" и пробиотику Хилак форте. В этой связи целью работы является выделение и идентификация выделенных микроорганизмов из ротовой полости, носоглотки и зубодесневых карманов, и оценка их чувствительности/резистентности к пробиотическим препаратам "Нормофлорины" и Хилак форте.

В экспериментах использовали биокомплексы "Нормофлорины" производитель ООО "Бифилюкс", г.Москва, Россия и представителя пробиотиков метаболитного типа Хилак форте (производитель "Меркле Гмбх", г. Блаубайрен, Германия).

Выделение микроорганизмов из ротовой полости носоглотки и зубодесневых карманов проводили согласно разработанным методикам [2,3,9]. Идентификацию осуществляли по описанным методикам [2,3]. Для выделения ДНК из биопроб и генотипирования Helicobacter pylori использовали набор реагентов "ДНК - ЭКСПРЕСС", "Хеликонал СА" и "Хеликонал VА"(НПФ "Метекс", Россия) [3]. Первичное выделение H. рylori с использованием эндодонтических бумажных штифтов проводили на колумбийском агаре с 5% бараньей кровью; пересев культуры осуществляли на агаре Шедлера с ванкомицином (10 мкг/мл) и амфотерицином Б (5 мкг/мл).

Необходимость использования в экспериментах чистой культуры Н. pylori продиктована тем, что, согласно опубликованным данным [3], наряду с такими микроорганизмами, выделенными из ротовой полости, как, стрептококки, стафилококки, вейлонеллы, лактобациллы, бактероиды, пептострептококки, актинобациллы и др., в 38,5% случаев у стоматологических пациентов бактериологическим методом выявляется и ПЦР-идентифицируется H. pylori в материале зубодесневых карманов.

Антибактериальную активность биокомплексов "Нормофлорины" и пробиотика Хилак форте определяли по методу J.H. Jorgensen и J.D. Turmide [12].

В результате выделения и идентификации были получены чистые культуры микроорганизмов, использованные в дальнейшей работе: стафилококки (S.saprophiticus, S.epidermidis, S.aureus), кандиды (C.albicans), псевдомонады (P.aeruginosa), протей (P.vulgaris), кишечная палочка (E.coli), хеликобактер (H.pylori), цитробактер (Cytrobacter) и энтеробактер (Enterobacter). В качестве контрольной использовали смешанную культуру микроорганизмов, выделенных из ротовой полости здорового человека (таблица).

Таблица 1. Характеристика антибактериальной активности биокомплексов "Нормофлорины" и пробиотика Хилак форте

При оценке антибактериальной активности биокомплексов "Нормофлорины" и препарата Хилак форте учитывали рекомендации Hi Media Laboratories Limited по интерпретации размеров зон задержки роста исследуемых микроорганизмов вокруг дисков с антибиотиками. Микроорганизм считается не чувствительным (резистентным) к антибиотику, если диаметр зоны ингибирования роста в среднем составляет 13 мм и меньше; при диаметре зоны ингибирования роста 18 мм и больше микроорганизм считается чувствительным; величина зоны ингибирования роста микроорганизма 16 мм считается промежуточной.

Приведенные в таблице результаты свидетельствуют о том, что биокомплексы "Нормофлорины" обладают выраженной антибактериальной активностью в отношении стафилококков (S.epidermidis, S.aureus), кандид (C.albicans), смешанной культуры бактерий и в отношении культуры Enterobacter, которая чувствительна к "Нормофлорину-Л".

Пробиотик Хилак форте обладает невысокой антибактериальной активностью и чувствительными к нему оказались только культуры стафилококков S.epidermidis, S.aureus.

Бактерии H. рylori нечувствительны как к биокомплексам "Нормофлорины", так и к пробиотику Хилак форте. В этой связи уместно привести данные Согласительной конференции "Маастрихт - IV", согласно которым применение некоторых про- и пребиотиков в качестве вспомогательной терапии, хотя и дало многообещающие результатов в отношении снижения частоты побочных эффектов при эрадикации H. рylori, однако "уровень доказательности" как и "степень обоснованности рекомендаций" оказались самыми низкими по принятым критериям [1, 12].

Отдельно следует остановиться на взаимоотношении бактерий кишечной палочки с изучаемыми пробиотиками. Как следует из данных таблицы вокруг тест-объектов, пропитанных препаратами пробиотиков, формируется нестерильная зона, свидетельствующая о том, что все биокомплексы "Нормофлорины", как и пробиотик Хилак форте, оказывают на культуру E.coli только бактериостатический эффект.

Иллюстрацией к результатам, приведенным в таблице, могут служить рисунки, характеризующие чувствительность (резистентность бактериальных культур к исследуемым пробиотикам (рисунок 1)).

Рисунок 1. Зоны ингибирования роста культур S.aureus(1), P.aeroginosa (2), C.albicans (3), H. рylori (4), S.epidermidis(5), S.saprophitus (6), E.coli (7), Enterobacter (8); А - "Нормофлорин - А", Б - "Нормофлорин-Б", Д - "Нормофлорин - Д", Г – Хилак форте

Кроме того, для комплексной оценки эффективности лечебно-профилактических мероприятий необходимо учитывать чувствительность клинических изолятов микроорганизмов. Так, выделенные нами микроорганизмы, относящиеся к контрастным видам, характеризуются различной чувствительностью к антибактериальным препаратам: из 14 тестируемых препаратов бактерии E.coli оказались чувствительными только к двум (нефлоксацину, цефотаксиму), синегнойная палочка к четырем (азитромицину, гентамицину, пефлоксацину, цефотаксиму), а золотистый стафилококк – к одиннадцати препаратам (ампициллину, азитромицину, амоксициллину, бензилпенициллину, гентамицину, доксициклину, левомицетину, нефлоксацину, рифампицину, цефотаксиму и экспериментальному наноструктурному препарату Спай форс). В заключении необходимо отметить, что выполненные исследования и полученные результаты свидетельствуют о том, что действительная пробиотическая эффективность биокомплексов "Нормофлорины" и препарата Хилак форте не такая, как декларируется в соответствующих инструкциях по применению. В этой связи целесообразно, на наш взгляд, исследовать биокомплексы "Нормофлорины" и пробиотик метаболитного типа Хилак форте в комплексном лечении заболеваний полости рта с обязательным изучением чувствительности микроорганизмов – этиологических агентов патологического процесса.

Список литературы:

1. Антибиотики, пробиотики и Helicobacter pylori. http://www.gastroscan.livejournal.com. Функциональная гастроэнтерология.

2. Богачева Н.В. Обоснование комплексного микробиологического подхода для идентификации микроорганизмов зубодесневых карманов у больных хеликобактериозом. /Н.В. Богачева, И.В. Дармов, И.П. Погорельский, И.Ю. Чичерин, И.М. Мокрецова, А.А.Шубенкина //Современная медицинская наука. – 2013. - № 5-6. – С. 64-75.

3. Бондаренко В.М. Микробиологическая диагностика дисбактериоза кишечника: методические рекомендации /В.М. Бондаренко, В.Г. Лиходед. – М: ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН. – 2007. – 70 с.

4. Бондаренко В.М. Клинический эффект жидких симбиотических биокомплексов, содержащих физиологически активные клетки бифидобактерий и лактобацилл /В.М. Бондаренко, Л.И. Шапошникова. – Тверь: ООО Издательство "Триада", 2009. – 96 с.

5. Инструкция по медицинскому применению препарата Хилак форте Регистрационное удостоверение П № 014917/01. Производитель "Меркл ГмбХ", г. Блаубайрен, Германия.

6. Коленчукова О.А. Особенности микрофлоры слизистой оболочки носа у больных аллергическим синуситом /О.Н. Коленчукова, И.А. Игнатова, С.В. Смирнова, Т.А. Капустина, Т.И. Ким//Вестник отолриноларингологии. – 2008. - № 5. – С. 33-35.

7. Коротеев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /А.И. Коротеев, С.А. Бабичев. – СПб: СпецЛит. – 2010. – 662 с.

8. Минушкин О.Н. Нарушение баланса микрофлоры и ее коррекция /О.Н. Минушкин, Г.А. Елизаветина, М.Д. Ардатская // Эффективная Фармакотерапия. Гастроэнтерология. – 2013. - № 4. – с. 4-8.

9. Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждениях /Приказ Минздрава СССР № 535 от 22.04.1985 г.

10. Ракитин Б.В. Helicobacter pylori – Маастрихт – IV. Согласительная конференция Маастрихт – IV "Диагностика и лечение инфекции Helicobacter pylori" Б.В.Ракитин http: www.gastroscan.ru/literature/authors/7009.

11. Урсова Н.И. Актуальные и нерешенные проблемы пробиотикотерапии /Н.И.Урсова// Лечащий врач. – 2013. № 8 http://www.lvrach.ru/2013/08/154357831/.

12. Jorgensen J.H. Susceptibility test methods: dilution and disc diffusion methods/J.H. Jorgensen, J.D.Turnide. – Manual of clinical microbiology. 9 th-ed. ASM Press. PressWashington – 2007.- P.1152-1172.